真菌毒素檢測(cè)介紹?
真菌毒素:又稱霉菌毒素,是一類無色、 無嗅、無味的化合物。霉菌毒素是霉菌在其所污染的食品中產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物。 真菌毒素廣泛污染農(nóng)作物、 食品及飼料等植物源產(chǎn)品。不僅能導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品霉敗變質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失,品質(zhì)降低,更嚴(yán)重的危害是被污染的糧食和飼料將誘發(fā)動(dòng)物以及人 類腫瘤發(fā)生。 在我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品及飼料中常見的、危害較大的真菌毒素有黃曲霉毒素、嘔吐毒素(脫氧雪腐鋪刀菌烯醇 )、玉米赤霉烯酮/ZEN、伏馬菌素、 豬曲霉毒素A等,這些毒素對(duì)農(nóng)產(chǎn)品及飼料的污染在2002 年被世界衛(wèi)生組織列為食源性疾病的重要根源。我國(guó)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)食品(GB27 61- 2017) 和飼料 (GB 13078-2017) 中的真菌毒素限量檢測(cè)都做出了明確的規(guī)定,另外2020 版藥典也提出了6類真菌毒素在中藥檢測(cè)中的要求。隨著社會(huì)對(duì)食品安全重視越來越強(qiáng),真菌毒素檢測(cè)需求持續(xù)增加。
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真菌毒素免疫親和柱凈化機(jī)理
免疫親和柱利用抗原抗體特異性可逆結(jié)合的原理,將毒素杭體與凝膠共價(jià)結(jié)合,然后填充柱子。將樣品提取溶液過 免疫親和柱,與抗體分子有特異性結(jié)合的黃曲霉毒素被固定,而非目標(biāo)化合物則沿柱流出,再用甲醇將黃曲霉毒素洗脫,根據(jù)待測(cè)物分子熒光特性, 用高效液相色譜或?qū)S枚繜晒馑贉y(cè)儀進(jìn)行定量檢測(cè)。
????黃曲霉毒素??????????????赫曲毒素????????????玉米赤霉烯酮?????????嘔吐毒素
????Aflatoxin B1????????????Ochratoxin A???????????Zear alenone???????Deoxynivalenol
真菌毒素免疫親和柱免疫親和柱凈化過程(黃曲霉毒素Bl為例)
一,樣品制備
參考《GB 5009.22-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉鑿素B族和G族的測(cè)定》。
1, 均質(zhì)
準(zhǔn)確稱取20.0g粉碎的樣品,加入100ml 70%甲醇 水(體積比)混勻,以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min;
2, 提取
提取液用玻璃纖維濾紙過濾或5000r/min離心Smin,取10ml濾液加入20ml水稀釋,混勻;
3, 過濾
用快速定性濾紙或玻璃微纖維濾紙或定量濾紙過濾,收集濾液,取15ml
注意:對(duì)千樣品提取液(pH<6或pH>8)的樣品, 需調(diào)節(jié)pH至中性, 并用玻璃微纖維濾紙/定量濾紙過濾; 對(duì)千渾濁難過濾的樣品, 可用離心機(jī)離心使其分層
二, 樣品凈化
注意:整個(gè)純化過程盡量不要讓柱子液體流干!
(1)取出免疫親和層析微柱,將上方塞子取出剪斷, 再插回親和柱上
(2)將柱子與泵流操作架上的玻璃針筒連接固定,去掉親和柱下方堵頭,用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌1次,流速1.5ml/min;
(3)將處理后的溶液上樣, 使 液體以1.5 ml/min的速度流出;
(4)用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌2次,流速1.5ml/min, 直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內(nèi)沒有殘余液體
(5)用1ml甲醇洗脫,用樣品瓶/玻璃試管接洗脫液, 流速1ml/min;
(6)脫后液體可用于檢測(cè)。
真菌毒素免疫親和柱免疫親和柱操作示意圖
*每盒產(chǎn)品內(nèi)附產(chǎn)品使用說明
一,注意事項(xiàng)
(1)黃曲霉毒素對(duì)人體有害,應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。
(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。
(3)免疫親和柱應(yīng)在2~8它保存,不要冷凍。
(4) 使用前,免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。
(5)樣本AFB1含量高千柱容量時(shí),需適當(dāng)降低上樣體積。
(6)必須保證過柱的樣品提取液pH在6~8之間,可用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整。
(7)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整,建議最低不少于1
保質(zhì)期
(1)4℃下保存期可長(zhǎng)達(dá)兩年;
(2)生產(chǎn)日期見外包裝盒
真菌毒素免疫親和柱黃曲霉毒素B1的檢測(cè)
測(cè)定條件
色譜柱:Shim-pack GIST C18um, 4.6x250mm ????(P/N: 227-30017-08) 流動(dòng)相:甲醇:水=45: 55 (V: V) 流速: 1.0 mUmin 檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)360nm , 發(fā)射波長(zhǎng)440nm 進(jìn)樣量:10 μL 柱溫:25℃ | |
真菌毒素免疫親和柱ShimsenIAC產(chǎn)品特點(diǎn)
高度特異性單克隆抗體,具有高吸附能力;
柱容量大,提高了純化效率; 易洗脫,達(dá)到低濃度樣本濃縮效果 樣品回收率穩(wěn)定在78 % -9 5 % 樣品回收率穩(wěn)定在78% -95% 樣品回收率穩(wěn)定在78 % -9 5 % 純化樣品適用 于ELISA法,HPLC法等。
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