- 品名： TaKaRa 含gDNA的定量反轉(zhuǎn)錄試劑盒
- 品牌： TaKaRa
- 型號： RR047Q
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
商品編號：SPU2021050507
上架時間：2022-01-06
| ■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR047A: 20 μl反應(yīng)×100次量) | |
| 1. gDNA Eraser100 μl2. 5X gDNA Eraser Buffer*1200 μl3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2100 μl4. 5X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)*3400 μl5. RT Primer Mix*4400 μl6. RNase Free H2O1 ml×27. EASY Dilution (for Real Time PCR)*51 ml *1 5X gDNA Eraser Buffer在反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)前使用，請務(wù)必進(jìn)行基因組DNA的除去反應(yīng)。*2 含有RNase Inhibitor。*3 含有dNTP Mixture。*4 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。*5 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時梯度稀釋cDNA或RNA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液。模板cDNA或RNA如果用水或TE Buffer稀釋時，由于受Microtube吸附作用等的影響，往往不能準(zhǔn)確地進(jìn)行稀釋，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果精度降低。使用本制品時，即使稀釋至低濃度也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確地稀釋，容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。本制品不影響反轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)，用其稀釋后的樣品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) (Code No. 9160/9160Q) 也可以單獨(dú)購買。注意：EASY Dilution (for Real Time PCR) 請與本公司Real Time PCR試劑組合使用，對于其他公司的同類制品的適用性本公司尚未進(jìn)行確認(rèn)。 | |
| ■ 制品說明 | |
| 為了準(zhǔn)確地進(jìn)行基因表達(dá)量分析，必須滿足只有cDNA作為模板檢出的先決條件，但Total RNA中常常混有基因組DNA，并可以直接作為PCR反應(yīng)的模板進(jìn)行擴(kuò)增，因此會造成解析結(jié)果不準(zhǔn)確。為了避免這種情況發(fā)生，通常將檢測用引物設(shè)計(jì)在內(nèi)含子前后的外顯子上，使基因組DNA得不到擴(kuò)增。但是，此方法不適合具有單個外顯子的基因或兩個外顯子之間所跨的內(nèi)含子過小的基因，同時當(dāng)基因組上有偽基因存在時、或設(shè)計(jì)引物對基因組有非特異性擴(kuò)增時、以及基因信息沒被完全解析的生物種等也同樣不適合于本方法。在這種情況下，我們常常需要對Total RNA樣品進(jìn)行DNase I處理，以除去殘存的基因組DNA。而DNase I處理通常要進(jìn)行復(fù)雜的純化操作，同時會造成RNA的降解和損失。PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因組DNA進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)的專用反轉(zhuǎn)錄試劑。Kit中使用了具有較強(qiáng)DNA分解活性的gDNA Eraser，通過42℃，2 min即可除去基因組DNA。同時由于反轉(zhuǎn)錄試劑中含有抑制DNA分解酶活性的組分，經(jīng)過gDNA Eraser處理后的樣品可以直接進(jìn)行15 min的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，因此，20 min內(nèi)即可迅速完成從基因組DNA去除到cDNA合成的全過程。使用本制品合成的cDNA適用于嵌合法和探針法qPCR分析，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模x擇與TB Green? Premix Ex Taq? II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 組合使用。*：Takara嵌合法Real Time PCR（qPCR）產(chǎn)品的名稱從2017年12月下旬開始，將逐步變更為「TB Green系列」。產(chǎn)品Code、性能和原有產(chǎn)品相比沒有變化，請繼續(xù)放心使用。產(chǎn)品名稱將隨新lot的產(chǎn)品逐步變更，產(chǎn)品網(wǎng)頁或操作說明書可能會先于產(chǎn)品標(biāo)簽變更，望知悉！ ■ 保存-20℃。 ■ 試劑盒特長1. 含有去除基因組DNA的gDNA Eraser，只需2 min即可除去基因組DNA。2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反應(yīng)用模板cDNA，是進(jìn)行2 Step Real Time RT-PCR反應(yīng)的理想試劑。3. 反轉(zhuǎn)錄引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix，可以均勻合成樣品中的各種cDNA。4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探針qPCR分析法各自適合的反應(yīng)體系，可以根據(jù)分析方法選擇體系。TB Green qPCR分析法和探針qPCR分析法區(qū)別如下：(1) 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RT Primer Mix的用量。(2) 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中總RNA的用量。5. Real Time RT PCR定量需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的條件就是需要將總RNA和反轉(zhuǎn)錄cDNA稀釋到較低的濃度。如果用水或TE Buffer稀釋時，由于模板濃度低不穩(wěn)定，因而會縮小曲線范圍，結(jié)果準(zhǔn)確度降低。本制品中附加了標(biāo)準(zhǔn)曲線制作用稀釋液EASY Dilution (for Real Time PCR) ，將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確稀釋，容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 ■ 注意事項(xiàng)1．使用本制品合成的cDNA與TB Green關(guān)聯(lián)制品組合使用時，建議使用：TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)以上制品與本制品組合使用，可以得到可信度高的結(jié)果。本制品與TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 組合使用時，有時反應(yīng)性能不好，不推薦使用。2. 當(dāng)同時需要進(jìn)行數(shù)次反應(yīng)時，應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然后再分裝到每個反應(yīng)管中。這樣可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。3. gDNA Eraser和PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時應(yīng)慢慢吸取。同時，要使用精確、量程適合的移液槍，并且不要使Tip插入液面過深，否則會因Tip壁粘著造成損失，而使酶量不足。4. 5X gDNA Eraser Buffer和5X PrimeScript Buffer 2（for Real Time）在使用前需Vortex振蕩混勻，輕輕離心后使用。5. 分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。 | |
| PrimeScript?RTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime) | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR047Q | PrimeScript?RTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime) | 10Rx |
| Takara | RR047A | PrimeScript?RTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime) | 100Rx |
| Takara | RR047B(A×4) | PrimeScript?RTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime) | 400Rx |
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