- 品名： 白鯊Biosharp BL779A Fura-2 AM (鈣離子熒光探針, 2mM)
- 型號： BL779A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品簡介：
Fura-2 AM是常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一，其在進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura-2，Fura-2特異性地結(jié)合Ca2+并發(fā)出熒光，結(jié)合Ca2+后的最大激發(fā)波長從結(jié)合前的380 nm向340 nm偏移，其發(fā)射熒光強度與結(jié)合Ca2+的濃度存在定量關系。一般用340nm和380nm波長激發(fā)Fura-2，通過使用與兩種激發(fā)對應的熒光強度比率來計算細胞內(nèi)的鈣離子濃度，這種比率測量方法可以消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細胞厚度差異等一些誤差因素。
本產(chǎn)品是配制于無水DMSO中的儲存液，濃度為2mM。
使用方法（僅供參考）：
一、試劑準備：
1．配制Pluronic F-127母液：100mg Pluronic F-127粉末中加入0.5ml DMSO配制成20%(w/v) Pluronic F-127母液。溶解時需要在40-50℃加熱20-30min。室溫保存，如果有結(jié)晶析出，重新加熱即可溶解，不影響使用。
二、熒光標記：
1．Fura-2 AM工作液的配制：用HBSS稀釋Fura-2 AM溶液，制備1-5μM的Fura-2 AM工作液。可以加入Pluronic F-127防止 Fura-2 AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細胞，Pluronic F-127的工作濃度是0.02%（1:1000 稀釋母液）。
注：工作液現(xiàn)配現(xiàn)用；具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基
礎上盡量使用最低探針濃度。
2．對于待檢測的培養(yǎng)細胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細胞3次。
3．將Fura-2 AM工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養(yǎng)15-60 min，然后除去Fura-2 AM工作液。
注：如果是首次實驗不能確定孵育條件，建議先嘗試 37℃孵育30分鐘，觀察熒光效果。如果細胞死亡較多，則適當縮短時間；
如果熒光強度太弱，則適當延長時間。
4．用緩沖液洗滌細胞3次，以充分去除殘留的Fura-2 AM工作液。
5．加入緩沖液覆蓋細胞，37℃孵育約20-30 min，以確保AM體在細胞內(nèi)的完全去酯化作用。
6．激光共聚焦顯微鏡等熒光檢測儀器觀察和檢測細胞。
注意事項：
1、本產(chǎn)品在4oC、冰浴等較低溫度下可能會凝固而粘在管底、管壁或管蓋，可以20-25oC水浴溫育片刻至全部融解后使用。
2、熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件：
-20℃避光保存，半年有效，避免反復凍融。
